慢性毒性實驗(從胚胎到成魚,150天)
暴露方式:胚胎階段同急性實驗。從12天后孵化開始,將幼魚轉移至更大的養殖缸中,并繼續暴露于不同濃度的實驗溶液(氯化鋁和GACP的多個稀釋濃度)中,直至150天(圖1)。
生長監測:在魚生長到60天、90天和150天時,測量所有魚的體重和體長;
繁殖評估:從60天開始,每天收集每個暴露缸的魚卵,統計產卵量、受精率,評估繁殖成功率。同時,收集親本魚(F0代)在ZG濃度組產下的受精卵(F1代),在清潔海水中培養至12天,觀察其發育情況,評估跨代毒性;
成魚行為學分析:在魚生長到105天時,從陰性對照組和兩個ZG濃度組中挑選成魚,進行一系列標準化的行為測試。所有行為測試均通過攝像機記錄,并使用EthoVision XT進行自動分析,確保了數據的客觀性和精確性;
群體行為測試:將6條魚(3雄3雌)放入一個新水箱,記錄其10分鐘內的活動,分析每條魚的運動距離和群體內個體間的平均距離,以評估群體的凝聚力;
探索能力測試(Z型迷宮):將單條魚放入一個Z型迷宮的安全區,2分鐘后打開通道,記錄其5分鐘內的行為。分析指標包括:離開安全區的潛伏期、運動距離、進入遠端區域的次數和時間等,以評估其探索欲和膽量;
自發活動測試:將單條魚放入一個3L的觀察缸中,適應10分鐘后,記錄其50分鐘的自發運動軌跡,分析運動距離和路徑彎曲度,評估其基礎活動水平;
焦慮水平測試:將單條魚放入一個狹長的新式水箱中,記錄其5分鐘內的垂直位置變化。分析其在上半區停留的時間和訪問次數。